Kulachart Jangpatarapongsa ^a,*, Kween Saimuang ^a , Duangporn Polpanich ^b, Raweewan Thiramanas ^b, Mongkol Techakasikornpanich ^a, Papichaya Yudech ^a, Venusrin Paripurana ^a, Chaniya Leepiyasakulchai ^c, Pramuan Tangboriboonrat ^d
a Center for Research and Innovation, Faculty of Medical Technology, Mahidol University, Bangkok, 10700, Thailand
^b National Nanotechnology Center (NANOTEC), National Science and Technology Development Agency (NSTDA), Pathum Thani 12120, Thailand
^c Department of Clinical Microbiology and Applied Technology, Faculty of Medical Technology, Mahidol University, Bangkok, 10700, Thailand
^d Department of Chemistry, Faculty of Science, Mahidol University, Bangkok, 10400, Thailand

เทคนิค PCR สามารถใช้ตรวจหา enterotoxigenic Escherichia-coli (ETEC) ซึ่งเป็นแบคทีเรียที่ก่อใหเ้กิดโรคอุจจาระร่วงจากตวัอยา่ งอุจจาระของผู้ป่วยได้โดยตรง แต่ความไวในการตรวจหาเช้ือดว้ยเทคนิค PCR จะลดลงถ้าในตัวอย่างมีสารยับยั้งและสารรบกวนการทำ PCR ในงานวิจัยนี้จึงเตรียมอนุภาคแม่เหล็ก (MNPs) ที่ดัดแปลงพื้นผิวด้วยการติด oligonucleotide primer ที่จา เพาะต่อ ETEC (primer-immobilized-MNPs)แล้วน าไปแยก DNA ของ ETEC จากสารปนเป้ือนในอุจจาระ จากนั้น สกัด DNA ที่ได้ด้วยวิธีการต้มแล้วจึงนำไปเพิ่ม ปริมาณของ DNA ของ ETEC เพื่อตรวจหาเชื้อ ETEC ต่อไป โดยประเมินประสิทธิภาพการแยก DNA โดยใช้เทคนิค PCR ที่ใช้โดยทั่ว ไปเทียบกับเทคนิค magneto-PCR-enzyme linked-gene-assay (MELGA) พบว่าการแยก DNA โดยใช้ primer-immobilized-MNPs มีความไวเพิ่มขึ้น 100 เท่า เมื่อเทียบกับการแยก DNA ด้วยการต้มโดยทั่วไปที่ไม่มีการใช้อนุภาค MNPs ทั้งนี้ประสิทธิภาพการแยก DNA ที่เพิ่มขึ้นเมื่อใชอ้นุภาค MNPs มีเหตุผลมาจากคุณสมบัติที่ดีของ primer ที่มีความจำเพาะสูงและประสิทธิภาพของอนุภาคขนาดนาโนที่ช่วยลดผลรบกวนจากสารยับยั้งการเกิด PCR ได้ นอกจากนี้ความไวในการตรวจหา ETEC ในตัวอย่างอุจจาระเพิ่มขึ้นจาก 108 เป็น 106 CFU/mL เมื่อใช้เทคนิค gel electrophoresisและเพิ่มขึ้นจาก 104 เป็น 102 CFU/mL เมื่อใช้เทคนิค MELGA จากผลการวิจัยที่ได้บ่งชี้ว่าการใช้ oligonucleotide -immobilized-MNPs ร่วมกับการสกัด DNA ด้วยวิธีการต้ม สามารถใช้แยก DNA ของ ETEC ในตัวอย่างอุจจาระได้สำเร็จ และเมื่อใช้งานร่วมกับเทคนิค MELGA ช่วยเพิ่มความไวต่อการตรวจหาเชื้อ ETEC ในตัวอย่างอุจจาระได้สูงมากยิ่งขึ้น

Reference

Biotechnology Reports2021,32, e00677(https://doi.org/10.1016/j.btre.2021.e00677.)